DNA合成儀的合成原理: DNA的固相合成:即將DNA的3端固定在基材上,然后沿3到5方向依次加入核苷酸,直至合成所需的DNA片段。與使用 DNA 聚合酶合成 DNA 不同。 合成過程: 第一個堿基的3端固定在樹脂上,下一個堿基的5-OH用二對甲氧基三苯甲基DMT保護,堿基上的氨基用苯甲酸保護,然后活化3-OH 與氨基磷酸酯化合物。 1.1 個堿基的 5-OH 和下一個堿基的 3-OH 形成亞磷酸三酯 2.然后與碘氧化形成磷酸三酯 3. 加入二lu乙酸去除第二個堿 5-OH 基團上的保護劑 DMT 合成完成后循環添加下一個堿基 1.用苯硫酚去除5-OH上的保護劑DMT 2. 用濃氫氧化銨將碎片與固體樹脂斷開并洗脫 3. 用濃氫氧化銨加熱去除底座上的保護劑。 4. 除去氫氧化銨并真空干燥 5. 液相色譜或 PAGE,回收長片段。
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第17年
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